蟲草素的提取技術(shù)

　　1、水提法

　　以人工蛹蟲草固體培養(yǎng)殘基為原料，采用索氏提取法提?。簻?zhǔn)確稱取處理好的樣品各10g，共4分，分別加入水、75%乙醇、95%乙醇、和無水乙醇做提取劑，在沸水浴中抽提8小時，收集提取液，除雜、濃縮，離子交換柱分離，收集洗脫液，分別用紅紫酸胺反應(yīng)定性定量鑒定蟲草素的含量。發(fā)現(xiàn)蟲草素得率分別為：0.0122%、0.0078%、0.0053%和0.0052%。

　　對人工蛹蟲草子實體及培養(yǎng)基中蟲草素進(jìn)行提取、純化及純度鑒定。結(jié)果，經(jīng)過對蛹蟲草子實體及培養(yǎng)基的粉碎、石油醚脫脂、80-85℃水浴12小時、調(diào)節(jié)等電點沉淀、732-NH4離子交換樹脂的分離、濃縮、4℃下低溫結(jié)晶，可得到一定純度的蟲草素晶體。

　　2、超臨界萃取法

　　超臨界流體萃取技術(shù)是近年來迅速發(fā)展被人們所認(rèn)知，而稱之為“綠色分離”的一種新型分離技術(shù)。CO2作為常用的超臨界流體，具有操作溫度低、分離效率高，無毒、無溶劑殘留、無二次污染等優(yōu)點，較之于傳統(tǒng)提取方法，超臨界CO2萃取克服了前者提取時間長、溫度高、系統(tǒng)開放等缺點，可同時萃取出較多的極性組分，非常適合于生物資源有效成分的提取分離。

　　以食用真菌蟲草或北蟲草人工培養(yǎng)后的發(fā)酵物為原料，采用超臨界技術(shù)萃取有效成分，同時結(jié)合常規(guī)方法除去雜質(zhì)、濃縮、結(jié)晶獲得蟲草素，并對蟲草素的紫外與紅外光譜特征與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了驗證，表明所提取結(jié)晶純度大于98%。

　　3、酶法提取

　　在中藥提取過程中，溶劑需要克服來自細(xì)胞壁及細(xì)胞間質(zhì)的傳質(zhì)阻力。選用合適的酶對中藥材進(jìn)行預(yù)處理，能分解構(gòu)成細(xì)胞壁的纖維素、半纖維素、及果膠，從而破壞細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生局部的坍塌、溶解、疏松，減少溶劑提取時來自細(xì)胞壁和細(xì)胞間質(zhì)的阻力，加快有效成分溶出細(xì)胞的速率，提高提取效率，縮短提取時間。而且反應(yīng)條件溫和，產(chǎn)物不易變性，降低成本，環(huán)保節(jié)能。

　　研究UPLC測定蟲草素的方法及酶法提取蛹蟲草中蟲草素的工藝條件。對酶種類、酶用量、酶解溫度、酶解時間、酶解pH值進(jìn)行考察，確定提取工藝。結(jié)果，中性蛋白酶提取蛹蟲草中蟲草素的工藝為：酶用量1.5%，酶解溫度50℃，酶解pH值5.5，酶解時間60min。該工藝條件下，蟲草素提取得率為0.732%，與未加酶的熱水浸提相比，蟲草素提取得率增加6.2倍。